製品概要

STEMcircles-LGNSOミニサークルDNAは、体細胞のリプログラミング能を有する4つの因子
（Lin28, Nanog, Sox2, Oct4）、及びGFPレポーター遺伝子を含みます。

STEMcirclesベクターは、

• 遺伝子発現に必要な最小限のDNAシークエンスが含まれています

• 通常使用されるプラスミドDNAより小さく、バクテリアDNAを含みません

• 細胞が外来のDNAに対して自然に作用するサイレンシングのメカニズムを
  避けることが出来ます
  

その結果、安定した遺伝子発現が行える為、通常のプラスミドDNAよりも優れたリプログラミングが
可能です。ウイルスを使用せず、ゲノムにインテグレートされない方法は、iPS細胞作製に理想的な
方法です。

STEMcircles-LGNSO Vector

4つのリプログラミング因子及びGFPの発現はCMVプロモーターで誘導される(Jia et al., 2010)

• ウイルスを使用せず、ゲノムにインテグレートされません。
• ひとつのベクターにすべてのリプログラミング因子を含みます。
• トランスフェクション効率をモニターする為にGFPレポーター遺伝子を使用しております。
• 抗生剤によるセレクションの必要がありません。

利点

• 簡単で安全なリプログラミングの方法
• 典型的なプラスミドより高いリプログラミング効率

必要な器具・試薬

下記Nature Methods1に紹介されているトランスフェクションの方法の１つに、Amaxa
nucleofector system(機械,プログラム,試薬)を使用した記載がございますので、ご参考
下さい。またここで紹介されている以外のトラスフェクションの方法もご利用頂けますので、
ご検討頂ければと思います。またセルソーターを使用することでGFP陽性細胞の分離及び、
最終的なiPSCクローンやトランスフェクトされた細胞の頻度を算出することが可能です。

参考文献

1. Fangjun Jia et al.A nonviral minicircle vector for deriving human iPS cellsNat Meth advance online publication (3) 197-199 (February 7, 2010)
2. Elayne Chan et al.Live cell imaging distinguishes bona fide human iPS cells from partially reprogrammed cellsNat Biotech 27 (11) 1033-1037 (November 2009)
3. Zhi-Ying Chen et al.Improved production and purification of minicircle DNA vector free of plasmid bacterial sequences and capable of persistent transgene expression in vivo.Hum Gene Ther 16 (1) 126-131 (January 2005)
4. Zhi-Ying Chen et al.Minicircle DNA Vectors Devoid of Bacterial DNA Result in Persistent and High-Level Transgene Expression in VivoMol Ther 8 (3) 495-500 (September 2003) 

製品資料

• STEMcircles 製品資料 
  
• STEMcircles 製品フライヤー
  

製品リスト

• ヒトES細胞＆ヒトiPS細胞研究用製品パンフレット
• mTeSR1：フィーダー細胞が不要なヒトES/iPS細胞維持用無血清培地
• TeSR2 ： アニマルプロテインフリーのヒトES/iPS細胞維持用無血清培地
• AggreWell：ES/iPS細胞分化のための均一なEmbryoid Bodiesの調整
• Dynabeads SSEA-4：ヒトES細胞から分化した幹細胞を高純度化
  
• mFreSR：無血清、DefinedなヒトESおよびiPS細胞凍結保存用メディウム
  

 

種による遺伝子型の違い

◆ IP kit◆

◆ IP kit ＋　磁石 ◆

セファロース/アガロースを使用した免疫沈降への悩みはございませんか？

以下は皆様からよく聞く免疫沈降に対する不満や悩みです。

その一

	「セファロースプロテインＧでオーバーナイトのインキュベーションをしてもターゲットの 回収量が上がらない」
	「Dynabeadsなら反応時間はたった10分間で十分です。全工程を含めても30分間しかかかりません」
Dynabeadsは表面がポリマーでコートされており、反応は全てビーズ表面上で行われます。このため抗体の結合や、免疫沈降反応が5-10分といっ た短時間で全て完了します。それに対してセファロースビーズは表面だけでなくセファロース内部が主な反応の場となっております。5-10分間では反応はほ とんど起こりませんし、十分な結合を得るのに数時間を要します。 .

  その二

	「免疫沈降を行うたびに異なるデータが得られる。再現性がない」
	「ウォッシュ時にロスのないDynabeadsなら常に安定したデータが得られます」
下図をご覧いただくと分かるようにセファロースやアガロースを使用した遠心によるウォッシュ法ではバッファーの交換を行う際にバッファーを最後まで抜 こうとするとビーズまで吸ってしまいます。これでは熟練した技術者でなければ再現性は得られません。 一方、Dynabeadsは磁石によりビーズをチューブの壁面に集めます。バッファーを全て除いてもビーズのロスは一切ありませんし、洗浄効率も高いため バックグラウンドが低くなります。さらに、新発売のIPキットではバッファーも全て調整済みなので誰が行っても同じ結果が得られます。

その三

	「何度ウォシュを行っても非特異結合によるバックグラウンドが減らない」
	「 Dynabeadsに変えるだけで解決されます。ウォッシュを何度も繰り返したり、最適なバッファー条件を検討するのは時間の無駄です」
何度も出てきていますが、セファロースやアガロースビーズは多孔性のビーズです。スポンジ状の網目構造をしており、ターゲットのタンパク質以外の不要な 物質も全てビーズ内に取り込まれます。一度ビーズ内に取り込まれ非特異的に吸着したタンパク質は何度ビーズ表面をウォッシュしても洗い流すことは困難で す。非特異結合によるバックグラウンドを無くすには、全ての反応がビーズ表面で行われる必要があります。Dynaebadsのように表面がポリマーにより コートされた担体を使用することが重要なのです。 まだセファロース/アガロースを使用しているのですか？  今すぐクリック→Dynabeadsによる最新 の免疫沈降法の詳細はこちら

もっと詳しく知りたい方はタンパク質関連製品特集ページへ

■　■特集■　■

Dynabeads Protein A / Protein Gを用いた高純度免疫沈降法

 IPがたった30分で可能！

【　Immunoprecipitation in NOW in 30 mins- Dynabeads vs Sepharose　】

今ならIPキットとセットで専用磁石半額！！
IP Kit Dynabeads Protein A/G キャンペーン2010 のご案内

お知らせ

実験医学8月号でDynabeadsが紹介されました。   クローズアップ実験法 「ChIP-on-chip のためのクロマチンIP のコツ」 クロマチンIP のコツを直江吉則先生（理研・RCAI・免疫転写制御）が詳説！ Dynabeadsとセファロースとの比較データも載っておりますので、皆様ご覧ください。

Dynabeads Protein A / Protein Gは粒径2.8μmの均一なビーズ表面にProtein AもしくはProtein G を共有結合で固定化した磁性ビーズです。これらの製品に利用された組換えProtein AおよびProtein G は夾雑タンパク質の共精製を防ぐためアルブミン結合部位を含みません。   このような方には特にDynabeadsの使用をお薦めします。  ↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓ ・免疫沈降に古典的なセファロースやアガロースを使っている方。   従来のＩＰテクニックにおける問題がDynabeadsでどのように改善されるのか？         セファロースによる免疫沈降ではウォッシュを行う度にサンプルをロスする恐れがありました。 Dynabeadsは壁面にビーズを集めるシステムなのでサンプルのロスがなくウォッシュもきれいに行えます。   タンパク質複合体の分離→参考文献（560KB） ・アプリケーション例 ・免疫沈降 ・クロマチン免疫沈降 ・共免疫沈降 ・プルダウンアッセイ     異なるイムノグロブリン（Ig)に対する結合特性 プロテインAとプロテインGは動物種やサブクラスの違いによりIgへの結合に違いがあります。 S: strong binding; M: medium binding; W: weak binding; N: no binding    なぜDynabeads？ Dynabeadsは他のビーズ製品と異なり粒子形状が非常に均一で滑らかな表面をしています。 このためビーズに対する非特異結合が少なく、再現性の高いデータが得られます。 また、磁気分離法は穏やかな方法で、貴重なタンパク質に最低限の物理ストレスしか与えません。 精製の結果、高純度の抗体または免疫沈澱タンパク質が得られます。

Dyanbeads	他社ビーズ

免疫沈降法とは？

免疫沈降法 - Wikipedia

• タンパク質複合体研究の為のDynabeads
• 免疫沈降プレゼンテーション（388KB） ←おすすめ！
  
• Dynabeads Protein A / Protein G製品フライヤー
• 免疫沈降トラブルシューティング（49KB）
• 製品情報
• 文献集ProteinA（17KB） /ProteinG （14KB）
• 国内研究者によるDynabeads Protein A/G使用文献リスト（57KB） ←おすすめ
• 免疫沈降アプリケーションノート ←
• 抗体のクロスリンクプロトコル（日本語） ←

• 免疫沈降用磁気ビーズパンフレット

免疫沈降用磁気ビーズ

コードNo.	品名	梱包単位
DB10001	Dynabeads Protein A	1mL
DB10002	Dynabeads Protein A	5mL
DB10008	Dynabeads Protein A	50ｍL
DB10003	Dynabeads Protein G	1mL
DB10004	Dynabeads Protein G	5mL
DB10009	Dynabeads Protein G	50ｍL
DB11201	Dynabeads M-280 Sheep anti-Mouse IgG	2mL
DB11202	Dynabeads M-280 Sheep anti-Mouse IgG	10mL
DB11203	Dynabeads M-280 Sheep anti-Rabbit IgG	2mL
DB11204	Dynabeads M-280 Sheep anti-Rabbit IgG	10mL

 IP KIT

Procarta Cytokine Assay の詳細はこちら

関連製品

• RNA遺伝子発現定量試薬 QuantiGene
• 転写因子定量試薬　Procarta Transcription Factor Assay

株式会社ベリタスは、第9回国際バイオエキスポのバイオ研究支援製品技術セミナーにて
ジーエルサイエンス株式会社様と共同でセルライン迅速構築技術のご紹介を予定しています。

日時 　：2010年7月1日(木) -- 15:00-16:00
場所 　：西展示棟　国際バイオEXPO内　EX-B1会場


ハミルトン社製ロボティクス新製品と最新アプリケーションの紹介
        ---  全自動セルライン迅速構築技術について---

STEMCELL Technologies 社のクローニング培地ClonaCell™とハミルトン社製の自動分注装置MicrolabSTAR EasyPick™と組み合わせることによるセルラインの迅速構築技術の紹介。今までセルライン構築にかかっていた時間と手間が大幅に短縮されます。

セルライン迅速構築技術に関するセミナーパンフレットはコチラ

事前申し込みは不要です。
第9回国際バイオEXPOにご来場いただいた方は自由にご参加いただけます。


製品展示はジーエルサイエンス株式会社様の展示ブースにて 行って

いますのでぜひお立ち寄りください。

ClonaCellに関する情報は以下のリンクからご覧いただけます。

・ClonaCellの製品情報はこちら

ClonaCellの動画解説

セミナータイトル

Treg関連ニュース

StemCell Technologies社では上記セミナーに関連して、ラボの壁紙としてご活用頂ける
「Regulatory T Cellsポスター」 を新しく作成いたしました。
ご希望の方には無償でお配りいたしますので、以下のサイトよりお申込みください。

無償の制御性T細胞のポスターご希望の方はこちら

RNA抽出ワークフローの比較  RNAGEM VS Trizol

新発売を記念してディスカウントキャンペーンを行っています。この機会に是非お試し下さい。

ZyGEM社 RNAGEM製品をキャンペーン期間中に限り、特別価格にて
ご提供いたしております。
 

 RNAGEMキャンペーンフライヤー

普段ご利用いただいている代理店様に上記製品コードにてご注文ください。

製品に関する詳細はコチラ 

新しいポスターを加え、ステムセルテクノロジーズ社ポスターの無料配布を

行っております。御希望の方には無料でのポスター配布をさせて頂きます。

   配布期限

      2010年6月8日  ―  2010年8月末日

下記のポスターのうち、御一つをお選び頂けましたら、無料にてご送付させて頂きます。

ポスターを御希望のお客様はページ最後のお申し込みフォームにて、お申し込み下さい。

・ Regulatory T cells
・ frequencies of cell types
・ 再生医療のための多能性細胞の単離
・ 抗原プロセシングと提示
・ ヒト臍帯血前駆細胞由来の造血コロニー
 

●「Regulatory T cells」
最新の制御性T細胞の発生、フェノタイプ、機能の概要、特にFOXP3を発現する制御性T細胞のサブセットについて記載されたポスターです

 
●「frequencies of cell types」
ヒト末梢血中に存在する各種細胞の割合、および血液処理のためのプロトコルについて記載されたポスターです。

●「再生医療のための多能性細胞の単離」
Pluripotent cell isolation for regenerative medicine

●「抗原プロセシングと提示」
Antigen processing and presentation

●「ヒト臍帯血前駆細胞由来の造血コロニー」
Hematopoietic colonies derived from human cord blood progenitors

申し込み方法 以下のフォームより、必要事項の記入をお願い致します。

尿中の濫用薬物を検出するための簡易キットです。
薬物汚染が深刻な問題になりつつある現代社会では以下のような企業防衛の目的で広く薬物の簡易検査が行われるようになってきています。

• 陰性の記録を残すことで企業および団体の安全性を証明する為
• 運輸業、運送業、警備業、危険物取扱業などにおける安全性と信頼性の保障の為
• 公務員、大学、芸能、スポーツ関連団体等の社会的影響の大きい団体における防衛策として

測定項目と検出のカットオフ 

Monitect-3　大麻、覚せい剤の検査用1テストあたり約1000円

Monitect-9　9項目の同時検査1テストあたり約2500円

 使用方法

1.  尿サンプルを滴下窓に3滴加える
2.  5分後に判定バンドの有無を確認し判定する
   

 注意事項

本製品はスクリーニング目的の簡易検査であり、薬物の使用を確定するものではございません。
陽性の結果が出た場合はGC/MSなどの特異性の高い定量方法で確認を行ってください。

• Monitectに関するマニュアル
• Monitect-3パンフレット
• Monitect-9パンフレット

• 唾液からの薬物検出キット　：　オラテクト

お申し込みは下記よりお願いします。

製品概要

コロニーアッセイの特徴

最近、多くの研究室でES/iPS細胞由来の造血幹細胞の評価でコロニーアッセイ
が使用されています。コロニーアッセイでは、細胞表面マーカー、遺伝子発現
解析では得られない未分化能を示すコロニー数やコロニーの種類（CFU-GM,
BFU-E など）についてのデータが取得可能です。

• 【 ES細胞由来の造血幹細胞での使用例 】

 「OP9 Stroma Augments Survival of Hematopoietic Precursors and
 Progenitors During Hematopoietic Differentiation from Human
 Embryonic Stem Cells」Ji et al. (2008),
 http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin/fulltext/121628348/PDFSTART
 カナダ、マックマスター大学の Ji らが独自にサイトカインを添加した
 MethoCult（H4230）を利用してヒトES細胞から分化させた造血幹細胞の
 コロニー形成能を評価した結果です。
 「Hematopoietic colony-forming cells derived from human embryonic
 stem cells」 Kaufman et al. (2001),
 http://www.pnas.org/content/98/19/10716.full
 アメリカ、ウィスコンシン大学病院 の Kaufman ら が MethoCult（H4435）を利用してヒトES細胞
 から分化させた造血幹細胞のコロニー形成能を評価した結果です。

「Hematopoietic and Endothelial Differentiation of Human Induced Pluripotent
Stem Cells」Choi et al.,(2009)
 http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin/fulltext/122228726/PDFSTART
アメリカ、ウィスコンシン大学の Choi らが MethoCult（H4435）を利用してヒトiPS
細胞から分化させた造血幹細胞のコロニー形成能を評価した結果です。

「Hematopoietic Development from Human Induced Pluripotent Stem Cells」Lengerke
et al.(2009),
 http://www.ingentaconnect.com/content/bsc/nyas/2009/00001176/00000001/art00023
 ドイツ、テュービンゲン大学の Lengerke らが MethoCult（H4434）を利用してヒトiPS
 細胞から分化させた造血幹細胞のコロニー形成能を評価した結果です。

• 【ES/iPS細胞由来の造血幹細胞での使用例】

「Enhanced generation of hematopoietic cells from human hepatocarcinoma
 cell-stimulated human embryonic and induced pluripotent stem cells」
 Lu et al. (2009),http://www.exphem.org/article/S0301-472X(09)00177-5/abstract
 H4230 was cited in this paper. They supplemented this with their own cytokines.
 カナダ、ブリティッシュコロンビア大学のLuらが独自にサイトカインを添加したMethoCult
 （H4230）を利用してヒトES/iPS細胞から分化させた造血幹細胞のコロニー形成能を
 評価した結果です。
 

MethoCult製品の詳細はコチラ

関連資料

• Cord BloodのCFCアッセイを7日間に短縮「MethoCult Express」
• マウス造血コロニー形成細胞アッセイ「Mouse MethoCult」
• 受託アッセイサービス「Contract Assay Service」
• 造血幹細胞の分離用磁気ビーズ試薬「EasySep」
• ヒト造血幹細胞/前駆細胞増殖の無血清培地「StemSpan」
• ALDH活性を指標にした幹細 胞/前駆細胞同定ツール｢ALDEFLUOR｣ 

• mTeSR1：フィーダー細胞が不要なヒトES/iPS細胞維持用無血清培地
• AggreWell：ES/iPS細胞分化のための均一なEmbryoid Bodiesの調整
• Dynabeads SSEA-4：ヒトES細胞から分化した幹細胞を高純度化
• mTeSR1：フィーダーフリーの無血清培地のiPS細胞での応用例
• mFreSR：無血清、DefinedなヒトESおよびiPS細胞凍結保存用メディウム 
• TeSR2：アニマルプロテインフリーのヒトES/iPS細胞維持用無血清培地
• 高純度ラミニン/多機能性幹細胞の長期培養を可能に!!!! 「Human Recombinant Laminin」